基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹
表達(dá)純化后的蛋白產(chǎn)物，特別是蛋白品的分析過(guò)程中，需要對(duì)蛋白的末端進(jìn)行驗(yàn)證，以保證表達(dá)純化產(chǎn)物的N端和C端序列準(zhǔn)確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，有著廣泛的應(yīng)用。百泰派克公司采用島津公司Edman測(cè)序系統(tǒng)，為廣大科研工作者和科研客戶(hù)提供純化后蛋白產(chǎn)物、抗體以及蛋白疫苗的N端測(cè)序服務(wù)。采用我們的測(cè)序系統(tǒng)，可以測(cè)定N端30個(gè)氨j酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統(tǒng)，可以測(cè)定N端的60-70個(gè)氨j酸。百泰派克公司也建立了以?xún)?yōu)良的LC-MS/MS技術(shù)進(jìn)行N-端測(cè)序的平臺(tái)，可以測(cè)出封閉和修飾的蛋白質(zhì)末端，與Edman降解法形成互補(bǔ)，保證N端測(cè)序服務(wù)的順利進(jìn)行。 在蛋白質(zhì)測(cè)序前，蛋白樣品首先經(jīng)過(guò)SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿(mǎn)足測(cè)序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；經(jīng)過(guò)染色確定把蛋白t帶并切出；使用Edman測(cè)序儀對(duì)得到的PVDF膜上的蛋白樣品進(jìn)行分析。Edman降解測(cè)序是通過(guò)循環(huán)反應(yīng)從蛋白質(zhì)的N端開(kāi)始逐個(gè)鑒定氨j酸的種類(lèi)，從而對(duì)蛋白質(zhì)的N端序列進(jìn)行測(cè)定。每一個(gè)Edman測(cè)序反應(yīng)包括3步：dìyī步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨j結(jié)合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結(jié)合的殘基轉(zhuǎn)化成為更為穩(wěn)定的PTH殘基，經(jīng)過(guò)在線的HPLC分析，根據(jù)洗脫時(shí)間確定氨j酸種類(lèi)。
應(yīng)用領(lǐng)域
? 蛋白表達(dá)產(chǎn)物的驗(yàn)證：重組蛋白插入位點(diǎn)和表達(dá)順序是否正確； ? 細(xì)胞株建立和發(fā)酵過(guò)程中蛋白產(chǎn)物的驗(yàn)證：驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過(guò)程中蛋白產(chǎn)物N端jiǎliúānsuān和信號(hào)肽是否正確處理； ? 蛋白降解/酶切分析：對(duì)降解/酶切形成的新蛋白片段N端進(jìn)行分析，確定斷裂/酶切位點(diǎn)； ? De-novo測(cè)序：對(duì)于蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中不存在的全新蛋白序列進(jìn)行分析。
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